Romeis - Mikroskopische Technik

von: Maria Mulisch, Ulrich Welsch

Springer Spektrum, 2015

ISBN: 9783642551901

Sprache: Deutsch

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Romeis - Mikroskopische Technik

	Mitwirkende	5
	Benno Romeis (1888–1971)	6
	Vorwort zur 19. Auflage	7
	Vorwort zur 18. Auflage	8
	Inhaltsverzeichnis	10
	1. Mikroskopische Verfahren	16
	1.1 Lichtmikroskopie	17
	Einleitung	17
	1.1.1 Die Geschichte des Mikroskops	17
	1.1.2 Einführung in die Physik des Lichtes	18
	1.1.3 Die Hauptkomponenten des Mikroskops	20
	1.1.4 Wie entsteht die Vergrößerung	22
	1.1.5 Die Objektive	23
	1.1.6 Kondensoren für die Durchlichtmikroskopie	25
	1.1.7 Grundsätzliche Einstellungen für die Mikroskopie	25
	1.1.8 Die Köhlersche Beleuchtung	26
	1.1.9 Kontrastmethoden	27
	1.1.10 Relieferzeugende Kontrastmethoden	30
	1.1.11 Stereomikroskopie	33
	1.1.12 Fluoreszenzmikroskopie	34
	1.1.13 Slide-Scanning-Mikroskopie	37
	1.1.14 Konfokale Mikroskopie	37
	1.1.15 Multiphotonenmikroskopie	39
	1.1.16 TIRF	39
	1.1.17 Luminiszenzmikroskopie	40
	1.1.18 Light-sheet-Fluoreszenzmikroskopie	40
	1.2 Elektronenmikroskopie	40
	1.2.1 Einleitung	40
	1.2.2 Transmissionselektronenmikroskopie	42
	1.2.3 Elektronentomografie	47
	1.2.4 EFTEM	48
	1.2.5 REM und ESEM	49
	1.2.6 Präparation für ESEM	55
	1.2.7 Rastersondenmikroskopie	56
	2. Hochauflösende Mikroskopie	58
	2.1 Einleitung	59
	2.1.1 Super-Resolution-Mikroskopie	59
	2.2 Strukturierte Beleuchtung – SIM	60
	2.3 Stochastische optische Rekonstruktionsmikroskopie (STORM)	62
	2.3.1 Das STORM-Prinzip	63
	2.3.2 Farbstoffe für STORM	64
	2.3.3 Mehrfarben-STORM	66
	2.3.4 3D-STORM	67
	2.3.5 Lebendzell-STORM	67
	2.3.6 Direkte stochastische optische Rekonstruktionsmikroskopie (dSTORM)	69
	2.4 GSDIM: Depletion des Grundzustandes	70
	2.4.1 Fluoreszenzzustände	70
	2.4.2 Verarmung des Grundzustandes	71
	2.4.3 3D-GSDIM	72
	2.5 STED – Stimulierte Emissions-Depletion	72
	2.5.1 Stimulierte Emission	72
	2.5.2 Rastermikroskopie	72
	2.5.3 Toroide Fokusformen	73
	2.5.4 Die Überschreitung der Auflösungsgrenze	73
	2.5.5 Lebendzell-STED-Mikroskopie	73
	2.5.6 3D-STED	74
	2.5.7 Präparationshinweise	75
	2.6 Literatur	76
	3. Probengewinnung zur mikroskopischen Untersuchung und Präparation	77
	3.1 Abstrichpräparate	78
	3.2 Ausstrichpräparate	78
	3.2.1 Ausstriche von Zellsuspensionen	78
	3.2.2 Organausstriche	80
	3.3 Tupf- oder Abklatschpräparate	80
	3.4 Isolationspräparate (Zupfpräparate)	80
	3.5 Isolation von Zellen	80
	3.5.1 Entnahme von adhärenten Zellen aus Zellkulturen	80
	3.5.2 Anreicherung von Suspensionszellen	80
	3.5.3 Zellsuspensionen von Epithelien	81
	3.5.4 Herstellung von zellwandlosen Pflanzenzellen (Protoplasten)	81
	3.5.5 Mazerationsmethoden von Zellverbänden	82
	3.6 Isolation von Gewebeteilen	82
	3.6.1 Biopsie	83
	3.6.2 Native Schnitte	83
	3.7 Isolation von Zellkompartimenten und Organellen	85
	3.8 Trennen und Sortieren von Zellen	85
	3.8.1 Durchflusscytometrie	85
	3.8.2 Zelltrennung mit Hilfe paramagnetischer Kügelchen (beads)	86
	3.9 Lasermikrodissektion	86
	3.10 Literatur	90
	4. Mikroskopische Untersuchungen von Lebendmaterial	91
	4.1 Arbeiten mit Lebendmaterial	92
	4.1.1 Voraussetzungen für das Arbeiten mit Lebendpräparaten	92
	4.1.2 Präparationsbeispiele für die Herstellung von Lebendpräparaten	92
	4.2 Durchführung von physiologischen Versuchen und Vitalfärbung	94
	4.2.1 Einteilungen der Vitalfärbung	94
	4.2.2 Eigenschaften von Vitalfarbstoffen	94
	4.2.3 Vitalfarbstoffe für die Untersuchung in der Hellfeldmikroskopie	95
	4.2.4 Nachweis reaktiver Sauerstoffspezies (ROS)	98
	4.3 Literatur	99
	4.4 Nachweisquellen und informative Links	99
	5. Fixierungen für Licht- und Elektronenmikroskopie	100
	5.1 Theorie der Fixierung	101
	5.1.1 Strukturerhaltung	101
	5.1.2 Nachweise	101
	5.2 Fixierungsverfahren	101
	5.2.1 Physikalische Fixierung	101
	5.2.2 Chemische Fixierung	102
	5.2.3 Fixierungsbedingungen und Anforderungen an die Präparate	106
	5.2.4 Praxis der Fixierung für die Lichtmikroskopie	107
	5.2.5 Praxis der Fixierung für die Elektronenmikroskopie	108
	5.2.6 Beispielhafte Anleitungen	109
	5.2.7 Aufbewahrung von fixiertem Material	110
	5.2.8 Fixierungs- und Einbettautomaten	111
	5.3 Literatur	111
	6. Schnittpräparation für die Lichtmikroskopie	112
	6.1 Einbettung	113
	6.1.1 Allgemeines	113
	6.1.2 Auswaschen des Fixierungsmittels aus den Präparaten	113
	6.1.3 Entwässern der Präparate	113
	6.1.4 Einbringen der Präparate in ein Intermedium (Zwischenflüssigkeit)	115
	6.1.5 Durchtränken der Präparate mit dem Einbettmittel	116
	6.1.6 Ausgießen (in Blöcke gießen) der Präparate im Einbettmittel	116
	6.1.7 Aushärten der Blöcke:	117
	6.2 Einbettzubehör	118
	6.2.1 Zubehör für die Einbettung von Hand	118
	6.2.2 Einbettautomaten	118
	6.2.3 Paraffinspender/Ausgießstation	118
	6.3 Einbettprotokolle	119
	6.3.1 Paraffineinbettung	119
	6.3.2 Kunststoffeinbettung	122
	6.3.3 Celloidineinbettung	124
	6.3.4 Einbettung in Celloidin-Paraffin	126
	6.3.5 Agareinbettung	126
	6.4 Mikrotome und Mikrotomie	127
	6.4.1 Mikrotomtypen	128
	6.4.2 Messerarten und deren Anwendungsgebiete	129
	6.4.3 Stellung des Mikrotommessers beim Schneiden am Schlitten- und Rotationsmikrotom	130
	6.4.4 Schneidetechnik am Mikrotom	131
	6.5 Leitfaden zur Beurteilung der Präparation	132
	6.5.1 Probleme und Artefakte bei der Schnittpräparation und ihre Abhilfe	132
	6.5.2 Beurteilung von Artefakten im Präparat	132
	6.6 Literatur	133
	7. Präparation für die TEM	134
	7.1 Schnittpräparation	135
	7.1.1 Fixierung	135
	7.1.2 Waschen	135
	7.1.3 Entwässern und Einbetten	135
	7.1.4 Ultramikrotomie	141
	7.2 Kontrastierungstechniken für die Transmissionselektronenmikroskopie (TEM)	149
	7.2.1 Einführung	149
	7.2.2 Negativkontrastierung	149
	7.2.3 Bedampfung	151
	7.2.4 Positive Kontrastierungen	152
	7.3 Literatur	157
	7.3.1 Zusammenfassende Literatur	157
	7.3.2 Einzelpublikationen	157
	8. Präparation für die konventionelle Rasterelektronenmikroskopie (REM)	158
	8.1 Präparate für die REM	159
	8.2 Präparationsschritte	159
	8.2.1 Reinigung	159
	8.2.2 Stabilisierung	160
	8.2.3 Freilegen interner Strukturen	160
	8.2.4 Abdruckverfahren	161
	8.2.5 Trocknung	161
	8.2.6 Befestigen der Präparate	162
	8.2.7 Sputtern	162
	8.2.8 Techniken für stark zerklüftete Objekte oder hohe Auflösung	163
	8.2.9 Aufbewahrung der Präparate	164
	8.3 Artefakte	164
	8.4 Literatur	164
	9. Kryotechniken	166
	9.1 Einleitung	167
	9.2 Kryopräparation für die Lichtmikroskopie	168
	9.2.1 Kryostatschnitte	169
	9.2.2 Einfrieren der Proben	169
	9.3 Kryopräparation für die Elektronenmikroskopie	171
	9.3.1 PLT	172
	9.3.2 Einfrieren der Proben	172
	9.3.3 Gefriersubstitution	176
	9.3.4 Gefrierbruch und Gefrierätzung	178
	9.3.5 Gefrierschnitte	178
	9.4 Kryo-Elektronenmikroskopie	182
	9.5 Literatur	183
	10. Färbungen	184
	10.1 Allgemeines zur Färbung	185
	10.2 Farbstoffe	185
	10.2.1 Der sichtbare Anteil des Spektrums, Farben und Licht siehe Kapitel 1.1.2	185
	10.2.2 Klassifizierung von Farbstoffen	185
	10.2.3 Wichtige Farbstoffe	186
	10.2.4 Ladung der Farbstoffe	186
	10.2.5 Färbevokabular	188
	10.2.6 Färbetheorien	189
	10.3 Herstellen der Farblösungen	190
	10.4 Färbezubehör	190
	10.4.1 Färbeküvetten	190
	10.4.2 Färbebänke, Tropfflaschen und sonstiges Zubehör	191
	10.4.3 Färbeautomaten	191
	10.5 Behandlung der Schnitte vor und nach dem Färben	192
	10.5.1 Schnittmontage und Trocknung	192
	10.5.2 Beschichtungsmöglichkeiten der Objektträger	193
	10.5.3 Behandlung der Schnitte unmittelbar vor der Anfärbung	194
	10.5.4 Behandlung der Schnitte nach der Färbung	195
	10.6 Färbemethoden	199
	10.6.1 Kernfarbstoffe und Kernfärbungen	199
	10.6.2 Cytoplasmafarbstoffe und Cytoplasmafärbungen	206
	10.6.3 Fluoreszenzfarbstoffe	208
	10.6.4 Pigmente	208
	10.6.5 Basophilie	211
	10.6.6 Metachromasie	212
	10.6.7 Übersichtsfärbungen	214
	10.6.8 Schnellfärbungen	215
	10.6.9 Bindegewebefärbungen	216
	10.6.10 Stoffnachweise	227
	10.6.11 Nachweis von DNA (Desoxyribonucleinsäure)	242
	10.6.12 Darstellung von Bakterien, Pilzen, und Protozoen im histologischen Schnitt	244
	10.6.13 Darstellung von Blutzellen im histologischen Schnitt	249
	10.6.14 Darstellung des Nervengewebes	250
	10.6.15 Färbungen an Kunststoffschnitten	268
	10.6.16 Stückfärbung	270
	10.6.17 Medizinische Cytodiagnostik	270
	10.7 Artefakte	281
	10.8 Herstellen mikroskopischer Injektions- und Korrosionspräparate	281
	10.8.1 Injektionspräparate	282
	10.8.2 Korrosionspräparate	284
	10.9 Einsatz der Polarisationsmikroskopie für die medizinische Diagnostik	286
	10.9.1 Grundlagen der Polarisationsmikroskopie	287
	10.9.2 Topo-optische Reaktionen	287
	10.10 Literatur	292
	10.10.1 Literatur zu Kapitel 10.9	294
	11. Fluoreszenzfärbungen	296
	11.1 Einführung	297
	11.2 Fluorochrome	297
	11.2.1 Primärfluoreszenz (Autofluoreszenz)	298
	11.2.2 Sekundärfluoreszenz (Fluorochromierung)	300
	11.2.3 Mehrfach-Fluorochromierung	300
	11.2.4 Anleitungen für einfache Fluoreszenzfärbungen	300
	11.2.5 Probleme bei der Fluoreszenzmikroskopie	304
	11.3 Live-Cell Imaging	305
	11.3.1 Probleme beim Live-Cell Imaging	305
	11.3.2 Fluorochrome zum Life-Cell Imaging	306
	11.4 Literatur	310
	12. Präparationstechniken und Färbungen von speziellen Geweben	312
	12.1 Präparation spezieller Gewebe	313
	12.1.1 Paraffineinbettung von großen Objekten	313
	12.1.2 Bearbeitung (Fixierung, Einbettung und z. T. Färbung) spezieller Organe	313
	12.2 Präparation von Hartgewebe für die Histologie	322
	12.2.1 Allgemeines	322
	12.2.2 Präparationsmöglichkeiten	323
	12.2.3 Fixierung von Hartgewebe	323
	12.2.4 Entkalkung	324
	12.2.5 Kunststoffeinbettung	326
	12.2.6 Schliffherstellung ohne Vorbehandlung	327
	12.2.7 Mazeration von Skelettteilen	328
	12.3 Literatur	328
	13. Neuronale Tracer und ihre Anwendungen (Neuronales Tracing)	329
	13.1 Retrograde und anterograde Tracer	330
	13.1.1 Retrograde Tracer	330
	13.1.2 Anterograde Tracer	332
	13.1.3 Tracer, die sowohl anterograd als auch retrograd laufen	332
	13.1.4 Lösen, Haltbarkeit und Lagerung der Tracersubstanzen	332
	13.1.5 Auswahl des Tracers für ein Experiment	332
	13.2 Allgemeiner Ablauf eines Versuchs	332
	13.3 Techniken zur Tracer-Applikation	332
	13.3.1 Kristalline Anwendung	332
	13.3.2 Druckapplikation	333
	13.3.3 Iontophoretische Injektion	334
	13.4 Perfusionskammer für in vitro-Farbstoffapplikationen	336
	13.5 Farbstoffapplikationen in der Interface-Kammer	338
	13.6 Anwendungsbeispiele für Tracer-Applikationen	340
	13.6.1 Fluoro Ruby® (FR)	340
	13.6.2 Biotinylierte Dextranamine (BDA)	344
	13.6.3 Choleratoxin B (CTB)	346
	13.6.4 Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin (PHA-L)	347
	13.6.5 Biocytin, Neurobiotin	348
	13.6.6 Carbocyanine (Lucifer Yellow, DiI, DiO, DiA)	352
	13.7 Literatur	353
	14. Spezielle Präparationsmethoden für tierische Organsysteme und Gewebe	355
	14.1 Einführung	356
	14.2 Totalpräparation des Zentralnervensystems (ZNS) von Knochenfischen (Teleostei)	356
	14.3 Herstellung chitinhaltiger Präparate – Bleich- und Mazerationsmethode	356
	14.4 Totalpräparate kleiner zoologischer Objekte	359
	14.5 Darstellung von Knorpel und Knochen kleiner Wirbeltiere	360
	14.6 Literatur	361
	15. Präparationstechniken und Färbungen von Protozoen und Wirbellosen für die Lichtmikroskopie	362
	15.1 Einführung	363
	15.2 Besonderheiten der Untersuchung	365
	15.2.1 Bedeutung der Lebendbeobachtung	365
	15.2.2 Herabsetzen der Beweglichkeit von Mikroorganismen	365
	15.2.3 Vital- und Supravitalfärbungen	365
	15.2.4 Betäubung	366
	15.2.5 Vorfixierung („Räucherungsmethoden“)	366
	15.2.6 Fixieren	369
	15.2.7 Vorbehandlung von Weich- und Hartsubstanzen	371
	15.2.8 Bemerkungen zu den Organismengruppen	372
	15.3 Literatur	382
	15.3.1 Originalartikel	382
	15.3.2 Zusammenfassende Literatur	382
	16. Präparationstechniken und Färbungen von Pflanzengewebe für die Lichtmikroskopie	384
	16.1 Einführung	385
	16.2 Mikroskopische Technik = Mikrotechnik	385
	16.2.1 Vorbereitung des Untersuchungsmaterials	385
	16.2.2 Wahl des Präparates	385
	16.2.3 Fixierung	390
	16.2.4 Fixierflüssigkeiten	390
	16.3 Weiterverarbeitung des fixierten Materials	391
	16.3.1 Konservierung	391
	16.3.2 Mazeration	391
	16.4 Herstellen von lichtmikroskopischen Präparaten	392
	16.4.1 Basismaterialien zur Herstellung mikroskopischer Präparate	392
	16.4.2 Schnitttechnik	392
	16.4.3 Weiterverarbeitung des Schnittes zu einem lichtmikroskopischen Präparat	393
	16.5 Ausgewählte Färbevorschriften	395
	16.6 Hämatoxylinlösungen	395
	16.7 Einschlussmittel für Dauerpräparate	400
	16.7.1 Wasserlösliche Einschlussmedien	401
	16.7.2 Wasserunlösliche Einschlussmittel	401
	16.8 Literatur	402
	17. Cytogenetik	403
	17.1 Allgemeines	404
	17.2 Chromosomenspreitung	404
	17.3 Chromosomenfärbungen	405
	17.3.1 Färbung mit Milchsäure-Orcein	405
	17.3.2 Q-Bänderung mit Quinacrin	405
	17.3.3 Q-Bänderung mit Hoechst 33258	406
	17.3.4 Distamycin A/DAPI- (DA/DAPI-)Färbung	406
	17.3.5 C-Bänderung mit Giemsa-Färbung	407
	17.3.6 G-Bänderung mit Giemsa-Färbung	407
	17.4 Fluorochromierung	407
	17.5 Histonnachweis	407
	17.5.1 Fast Green FCF für Histone	408
	17.5.2 Dansylchlorid	408
	17.6 Extraktionsmethoden für Nucleinsäuren	408
	17.6.1 Säureextraktion	408
	17.6.2 Enzymatische Extraktion	409
	17.7 Literatur	409
	18. Enzymhistochemie	410
	18.1 Allgemeines	411
	18.1.1 Gewebevorbehandlung	411
	18.2 Ausgewählte Methoden von Enzymnachweisen	413
	18.2.1 Phosphatasen	413
	18.2.2 Carboxylesterhydrolasen	417
	18.2.3 Oxidasen, Peroxidasen	419
	18.2.4 Dehydrogenasen	420
	18.2.5 Transferasen	422
	18.2.6 Lyasen	423
	18.3 Literatur	423
	19. Immunlokalisation	425
	19.1 Einführung	426
	19.1.1 Grundlagen	426
	19.1.2 Aufbau und Eigenschaften von Antikörpern	426
	19.2 Herkunft, Auswahl, Überprüfung und Reinigung von Antikörpern	427
	19.2.1 Herstellung von Antikörpern	427
	19.2.2 Reinigung von Antikörpern	430
	19.2.3 Antikörperkonzentrationen	431
	19.2.4 Lagerung von Antikörpern	431
	19.3 Nachweismethoden und Detektion	431
	19.3.1 Direkte und indirekte Immunmarkierung	431
	19.3.2 Auswahl der Antikörper	432
	19.3.3 Indirekte Immunmarkierung über Protein A	432
	19.3.4 Die (Strept-)Avidin-Biotin-(ABC-)Technik	433
	19.3.5 Lokalisation mehrerer Antigene	433
	19.3.6 Detektion	434
	19.4 Anforderungen an die Präparate	439
	19.4.1 Whole mount-Immunmarkierung und preembedding-Verfahren	439
	19.4.2 Markierung an Schnitten	439
	19.4.3 Durchführung der Immunmarkierung	440
	19.5 Kontrollen und Problembehandlung	443
	19.5.1 Positiv- und Negativkontrollen	443
	19.5.2 Antigendemaskierung	443
	19.6 Lokalisation von Molekülen mit Hilfe Antikörper-ähnlicher Nachweissysteme	445
	19.7 Ausgewählte Anleitungen	445
	19.7.1 Affinitätsreinigung von Antikörpern	446
	19.7.2 Antigendemaskierung	446
	19.7.3 Antigendemaskierung für die Immunelektronenmikroskopie	448
	19.7.4 Immunhistologische Markierungen	448
	19.7.5 Immunmarkierungen für die Elektronenmikroskopie	449
	19.7.6 Immunmarkierungen für Licht- und Elektronenmikroskopie	450
	19.7.7 Silberverstärkung	450
	19.8 Literatur	451
	19.8.1 Originalartikel	451
	19.8.2 Zusammenfassende Literatur	451
	20. in situ-Hybridisierung	452
	20.1 Einleitung	453
	20.1.1 Prinzip	453
	20.1.2 DNA:DNA-in situ-Hybridisierung	454
	20.1.3 RNA:RNA-in situ-Hybridisierung	456
	20.2 Sonden	456
	20.2.1 DNA-Sonden	457
	20.2.2 RNA-Sonden	458
	20.2.3 Sonden für Bakterien- oder Virussequenzen	459
	20.3 Markierung der Sonden	459
	20.4 Anforderungen an die Präparate	459
	20.5 Präparation von Chromosomen und Zellkernen	460
	20.6 Vorbehandlung der Präparate	460
	20.7 Denaturierung der Nucleinsäuren	461
	20.8 Hybridisierung	461
	20.8.1 Spezifität der Hybridisierung	461
	20.8.2 Stringenz	461
	20.8.3 Verminderung von unspezifischer Hintergrundmarkierung	461
	20.8.4 Hybridisierungskinetik	462
	20.8.5 Kontrollen	462
	20.9 Laborausstattung und Reagenzien	462
	20.9.1 Ausstattung	463
	20.9.2 Reagenzienqualität und -Handhabung	463
	20.10 Arbeitsvorschriften	463
	20.10.1 Vorbereitungen	464
	20.11 Probleme und Fehlerquellen	477
	20.12 Literatur	479
	20.13 Internetforen	480
	20.14 Bücher	480
	21. Tissue-Printing	481
	21.1 Einführung	482
	21.2 Generelle Methodik des Tissue-Printing	482
	21.3 Tissue-Prints von zartem Gewebe mit Hilfe von Kryostatschnitten	483
	21.4 Nachweise an Tissue-Prints	484
	21.4.1 Western-Tissue-Print	484
	21.4.2 Northern-Tissue-Print	486
	21.4.3 Lokalisation von Enzymaktivität am Tissue-Print	487
	21.5 Literatur	488
	21.5.1 Originalartikel	488
	21.5.2 Zusammenfassende Literatur	488
	22. Reporterproteine	489
	22.1 Einleitung	490
	22.1.1 Enzymatische und lichterzeugende Reporter	490
	22.1.2 Chemilumineszenz oder Fluoreszenz?	492
	22.1.3 Zur Geschichte der FP	492
	22.1.4 Grundlegendes zu fluoreszierenden Proteinen	492
	22.2 Fluoreszierende Reporter in der Anwendung	495
	22.2.1 Konstruktion geeigneter Expressionsvektoren	495
	22.2.2 Transiente und stabile Genexpression	496
	22.2.3 Analyse durch Fluoreszenzmikroskopie	497
	22.3 Literatur	500
	23. Qualitative und Quantitative Analyse in der Mikroskopie	501
	23.1 Einleitung	502
	23.2 Erstellung mikroskopischer Bilder	502
	23.2.1 Digitale Kameras	502
	23.2.2 Bilddarstellung bei digitalen Schwarz-Weiß- oder Farbkameras	503
	23.2.3 Das Nyquist-Theorem	505
	23.2.4 Verwendung des adäquaten Kameraadapters	505
	23.2.5 Kalibrierung	506
	23.2.6 Bildformate und Komprimierung	506
	23.3 Bildanalyse	506
	23.3.1 Konventionelle Verfahren zur Bildanalyse	506
	23.3.2 Digitale Analyse	507
	23.4 Automatisierte Experimentdurchführung mit motorisierten Mikroskopen	510
	23.4.1 Motorische Komponenten	510
	23.4.2 Mehrdimensionale Mikroskopie	511
	23.4.3 Lebendzellmikroskopie	511
	23.5 Ausgewählte Verfahren in der modernen Fluoreszenzmikroskopie	512
	23.5.1 Quantifizierung von Fluoreszenzsignalen	512
	23.5.2 Co-Lokalisation	513
	23.5.3 Untersuchung der Proteindynamik in lebenden Zellen mit Hilfe fluoreszierender Proteine	514
	23.5.4 FRET	516
	23.5.5 Quantitative und qualitative Analyse des Fluoreszenzspektrums	517
	23.5.6 Quantitative Analyse von Ionenkonzentrationen / Ratio Imaging	519
	23.6 Bezugs- und Informationsquellen für Software und Analysemodule	520
	23.7 Literatur	520
	24. Morphometrie in der Mikroskopie: stereologische Methoden	521
	24.1 Einführung	522
	24.1.1 Warum Morphometrie?	522
	24.1.2 Stereologie	522
	24.2 Voraussetzungen	524
	24.3 Methoden	525
	24.3.1 Bestimmung des Referenzraumes	525
	24.3.2 Probenauswahl (Sampling)	526
	24.3.3 Ausgewählte Messungen	526
	24.4 Literatur	529
	25. Arbeitsschutz und Sicherheit im Labor	531
	25.1 Einführung	532
	25.2 Gefährdungsbeurteilung	532
	25.3 Allgemeine Grundregeln	532
	25.4 Sicherheitstechnische Laborausstattung	533
	25.5 Notfalleinrichtungen	533
	25.6 Persönliche Schutzausrüstung	533
	25.7 Hautschutz/Hautschutzplan	534
	25.8 Umgang mit Untersuchungsmaterial	534
	25.9 Desinfektion	534
	25.10 Gefahrstoffe	534
	25.10.1 GHS (Global Harmonisiertes System) oder CLP (Classification, Labelling, Packaging)	534
	25.10.2 Kennzeichnung von Gefahrstoffen	536
	25.10.3 Aufbewahrung, Umgang und Transport von Gefahrstoffen	538
	25.10.4 Aufnahmewege von Gefahrstoffen	540
	25.10.5 Freisetzung von Gefahrstoffen	540
	25.10.6 Gefahrstoffverzeichnis	540
	25.10.7 Sicherheitsdatenblätter	541
	25.10.8 Betriebsanweisung	541
	25.10.9 Unterweisung	541
	25.11 Umgang mit Laborabfällen	541
	25.12 Umgang mit Mikrotommessern	541
	25.13 Brandschutz	541
	25.14 Infos zum Arbeitsschutz und GHS/CLP	543
	25.15 Literatur	543
	Anhang 1	544
	Tabellen	545
	Beispielhafte Programme für die Fixierung und Einbettung für die TEM im Einbettautomaten	572
	Anhang 2	576
	Aktuelle Bücher zu mikroskopischen Techniken	577
	Anhang 3	580
	Liste der Anleitungen	581
	Index	587

Romeis - Mikroskopische Technik

von: Maria Mulisch, Ulrich Welsch

Romeis - Mikroskopische Technik

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